总RNA提取试剂盒

产品货号：

SN0010

中文名称：

总RNA提取试剂盒

英文名称：

GenZol Total RNA Extraction Kit

产品规格：

100T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

本试剂盒是基于GenZol Reagent改进后的离心柱式总RNA提取试剂盒，适用于次生代谢物较少的植物组织（如幼苗、幼叶等）、培养细胞、动物组织和微生物等样品。试剂盒中的GenZol Reagent具有极强的裂解能力，可在短时间内裂解组织和细胞样本，并有效抑制RNase活性，保证RNA的完整性；搭配独特的硅基质膜吸附技术，通过离心吸附柱可在高盐状态下高效专一的结合溶液中的RNA，同时最大限度去除蛋白质、无机盐离子及有机杂质，提取的总RNA纯度高、完整性好，可以直接用于RT-PCR、Northern Blot、体外翻译及mRNA纯化等实验。

产品特点：

适用范围广：本试剂盒适用于次生代谢物较少的植物组织（如幼苗、幼叶等）、培养细胞、动物组织和微生物等样品的总RNA提取。
操作简单快速：整个过程可在1小时内完成。
操作可视：溶液呈粉红色，便于分离水相及有机相。

产品组成：

组分	规格
GenZol Reagent	100mL
Buffer GRW1	60mL
Buffer GRW2	24mL
RNase-Free ddH2O	15mL
RNase-Free GenZol RNA吸附柱	50T×2

保存：室温，其中GenZol Reagent在2～8℃避光保存，有效期1年。

用户自备：
氯仿（或氯仿替代物）、无水乙醇

注意事项：

GenZol Reagent中含有苯酚等物质，使用时应穿戴防护物品，避免沾染皮肤、眼睛及衣物，防止口鼻吸入。如不慎沾染皮肤或眼睛，立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生帮助。
RNA在GenZol Reagent中时不会被RNase降解。但后续处理过程中应使用RNase-free的实验器具，包括枪头和离心管，并且RNA实验用的器具需专门使用，不要用于其它实验，避免交叉污染。

使用方法：

样品准备：
- 动物/植物组织样品：
  - 取新鲜组织立即用液氮速冻，迅速转移至液氮预冷的研钵中充分研磨，期间不断加入液氮，直至研磨成粉末状(无明显可见颗粒)。
  - 将研磨至粉末状的样品转移到离心管中，每50～100mg样品加入1mL GenZol Reagent，匀浆处理。
  - 室温静置5min（使核酸蛋白复合物完全分离）。
    - 样品体积一般不要超过GenZol Reagent体积的10%，若取样量过多会导致提取的RNA中有DNA污染。
    - 可选步骤：对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品，如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎，可以在匀浆处理后12000rpm(~13400×g) 4℃离心10min以除去不溶物质，取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。
- 贴壁细胞样品：
  - 倒出培养液，用1×PBS清洗1次。
  - 每10cm²培养面积生长的细胞中加入1mL GenZol Reagent，轻微晃动，使本制品充分覆盖到细胞表面，使用移液枪反复吹打使细胞裂解。
  - 将含有细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹打直至裂解液中无明显沉淀。
  - 室温静置5min。
- 悬浮细胞样品：
  - 将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8000×g 4℃离心2min收集细胞。
  - 每5×10⁶～1×10⁷个细胞加入1mL GenZol Reagent，用移液枪反复吹打直至裂解液中无明显沉淀。
  - 室温静置5min。
- 血液样品：
  - 直接取新鲜的血液，加入3倍体积的GenZol Reagent（推荐0.2mL全血加入0.6mL GenZol Reagent），充分振荡混匀。
  - 室温静置5min。
样品经GenZol Reagent匀浆后，可在-80℃保存至少一个月。
向上述裂解液中加入1/5 GenZol Reagent体积的氯仿（或氯仿替代物），盖好管盖，剧烈振荡15s（彻底混合有利于后续的相分离），溶液呈乳浊状，室温静置5min。
12000×g 4℃离心10min。此时样品分为3层，即上层无色的水相（含RNA）、中间层和下层粉红色的有机相。小心吸取上层水相（水相体积约占GenZol Reagent体积的60%，建议吸取500μL左右，避免吸取到中间层导致基因组DNA的污染）转移至新的离心管中。
加入0.5倍水相体积的无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到溶液和沉淀一起转入RNase-Free GenZol RNA吸附柱中，12000rpm 4℃离心30s（若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱中，请分两次转入吸附柱中离心），弃掉收集管中的废液。
向吸附柱中加入500μL Buffer GRW1，12000rpm 4℃离心30s，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
向吸附柱中加入500μL Buffer GRW2（使用前请检查是否加入无水乙醇），12000rpm 4℃离心30s，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
重复操作步骤6。
12000rpm 4℃离心2min，弃去收集管，将吸附柱放入新的1.5mL离心管中，开盖室温静置2～5min，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液的残留，可能会影响后续的RT等实验。
向吸附膜的中间部位悬空滴加30～100μL RNase-Free ddH2O，室温放置2min，12000rpm 4℃离心2min，得到RNA溶液，将洗脱的RNA置于-80℃保存。
洗脱液体积过小影响回收效率，柱子最小的洗脱体积是30μL。

常见问题：

RNA降解？
- 样品处理或保存不当。尽量使用新鲜样品，取样后立即液氮速冻置于-80℃冰箱保存，尽快使用。
- 样品过量。请参考说明书推荐取样量。
- 环境、试剂或耗材中含有RNase。使用RNase-free的试剂及耗材，建议在通风橱中操作。
RNA得率较低？
- 样品研磨或裂解不充分。建议参考说明书充分研磨、振荡样品，使样品充分裂解。
- 取样量较少。适当增加样品量。

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